人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒
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| 类别 | 黄页 仪器仪表网 | 来源 | 经纪人 |
人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒
人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒?
【工作原理】
14-3-3是一个丰富的广泛表达的蛋白家族，是一个可以自发聚集成二聚体的多功能蛋白质。初在脑脊液提取物中检测出14-3-3蛋白的相对高丰度。14-3-3广泛分布于从植物到哺乳动物等所有真核生物中，哺乳动物有7种异构体，大部分以同源或异源二聚体形式存在于细胞质中，与多种细胞蛋白结合并相互作用。14-3-3以稳定的同源/异源二聚体形式聚集在一起，能同时结合两个配体。所有14-3-3的三级结构都极其相似，哺乳动物14-3-3蛋白是由两个单体连接形成的杯状二聚体结构，每个单体由9个α螺旋（αA～αI）组成，反向平行排列成L型结构，彼此间被一短环间隔，其中αC和αD的氨基酸序列长（30～34个氨基酸残基），它们跨越整个单体并连接形成一个卷曲的螺旋结构。二聚体界面由一个单体的αA与另一个单体的αC和αD构成，其中含有疏水性残基和极性残基，形成高度保守的兼性沟槽。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体为单克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体，检测相人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体为多克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒?
【每套试剂盒中内容】(96T)
材料 数量
人14-3-3蛋白标准品 96T(2vial）
预包被人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体的96孔板 96T( 8×12)
生物素标记人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体 96T(1:100)
ABC（过氧化物酶标记亲和素） 96T(1:100)
样品稀释液 96T
人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体稀释液 96T
ABC稀释液 96T
TMB显色液A 96T
TMB显色液B 96T
TMB终止液 96T
ELISA专用洗涤液 96T(1:25)【需要而未提供的试剂和器材】
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 自动洗板机。
4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5． 蒸馏水，容量瓶等
6． 干净的试管和Eppendof管。人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒?
【注意事项】
1． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
2． 配制各种试剂时，切记混匀！
3． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
4． 建议所有人14-3-3蛋白标准品、样本都做双份检测。
5． 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
6． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、脑脊液、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。【试剂的准备和保存】
A. 人14-3-3蛋白标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入500ul样品稀释液，彻底溶解后取出250ul加入到750ul样品稀释液中，混匀后做倍比稀释。
稀释后的人14-3-3蛋白标准品在2小时内使用。B．生物素标记人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体工作液：在使用前2小时
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